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血块基因组DNA提取试剂盒图片
产品货号:
WE0185
中文名称:
血块基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
BloodClot Blood DNA Extraction Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
  本试剂盒供了一种快速、简单、高效的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液,也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后,DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后,高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶抑制剂和其他杂质的残留,A260/A280的比值在1.5-2.3。DNA最长可达50 kb,适用于PCR,Real-time PCR、Southern blotting等实验。

试剂盒组成
组份50次
Buffer GTL15ml
Buffer GC15ml
Buffer GW1(浓缩液)13ml
Buffer PW2(浓缩液)18ml
Buffer GE15ml
蛋白酶K 25mg
蛋白酶K 储存液1.25ml
吸附柱DC及收集管50套


自备试剂:无水乙醇

产品特点
1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀,彻底去除污染物及下游反应抑制物,快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇,混合均匀,并在试剂瓶标签上做好标记。
3、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、将一个水浴锅预热至56℃,另一个水浴锅预热至70℃。
5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。

操作步骤
1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液,然后再加入180μl Buffer GTL。
注意:若样品数量较多,蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合,然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中,剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟,期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC,彻底涡旋混匀。短暂离心后,70℃孵育10分钟,期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意:加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀,大部分情况下,在孵育过程中,沉淀会消失,沉淀不会影响后续的实验。
4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇,轻轻颠倒混匀样品,室温放置5分钟。短暂离心,将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意:
1)需要将样品和乙醇混合均匀。
2)当室温高于25℃时,需要先将乙醇预冷。
5、将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,12000rpm(~13400×g)离心1分钟。倒掉收集管中的废液,将Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、12000rpm离心2分钟,倒掉废液,将吸附柱置于室温放置2-5分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个无菌的1.5ml离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl BufferGE,室温放置2-5分钟。12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,室温放置5 min后再次离心;若洗脱体积小于20μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或去离子水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件:室温(15~30℃)。
相关搜索:血块基因组DNA提取试剂盒BloodClot Blood DNA Extraction Kit
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